一•◕、禽白血病病毒檢測試劑盒
二•◕、通用名稱·▩·:禽白血病病毒檢測試劑盒 (實時熒光PCR法)
三•◕、包裝規格 50T/盒
四•◕、預期用途·▩·:
適用於禽白血病病毒檢測•▩◕☁◕,可用於臨床禽白血病病毒感染的輔助診斷•▩◕☁◕,但不作確診使用▩╃•↟。
五•◕、原理·▩·:
針對引起禽白血病的禽C型反錄病毒群的病毒基因組高度保守區域設計特異性引物和探針•▩◕☁◕,在反應體系中含禽C型反錄病毒群的病毒基因組模板的情況下•▩◕☁◕,PCR反應得以進行並釋放熒光訊號▩╃•↟。利用熒光定量PCR儀對PCR過程中相應通道訊號進行實時監測和輸出•▩◕☁◕,實現檢測結果的定性分析▩╃•↟。
六•◕、組成·▩·:
RT-PCR反應液•◕、混合酶液•◕、陽性對照•◕、陰性對照▩╃•↟。
七•◕、樣品DNA的製備
用自選方法提取Cps DNA▩╃•↟。注意·▩·:DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素▩╃•↟。如果不能很好純化樣品DNA,後面的PGR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度▩╃•↟。
製備Cps標準曲線(以10-10E6這6個10倍稀釋度為例▩╃•↟。由於標準品濃度非常高•▩◕☁◕,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行•▩◕☁◕,千萬不能汙染樣品或本試劑盒的其他成分)▩╃•↟。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原•▩◕☁◕,本產品不提供活體病毒做陽性對照•▩◕☁◕,只提供沒有傳染性的•◕、可以直接使用的DN段作為陽性對照▩╃•↟。
1•◕、標記6個離心管•▩◕☁◕,分別為6,5,4,3,2和1號▩╃•↟。
2•◕、用帶芯槍頭分別加入45μL超純水(最好用帶芯槍頭•▩◕☁◕,下同)
3•◕、先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩衝液或超純水10倍梯度稀釋到10E7複製/μL(注·▩·:請不要將本試劑盒提供的標準品次性稀釋至10E7複製/μL,建議每次稀釋10倍•▩◕☁◕,梯度稀釋至0E7複製/μL)
4•◕、在6號管中加入5μL10E7複製/uL的Cps陽性對照(上步稀釋所得)•▩◕☁◕,充分震盪1分鐘•▩◕☁◕,得10E6複製/μL的陽性對照.
八•◕、技術引數
1•◕、符合行業標準SN/T1686-2005《新城疫病毒中強毒株檢測)法·▩·:熒光RT-PCR法》的檢測要求•▩◕☁◕,可用於禽肉•◕、禽類組織臟器禽類排洩和分泌物•▩◕☁◕,及其洩殖腔和咽喉拭樣中新城疫病毒的檢測▩╃•↟。
2•◕、靈敏度·▩·:對於接種的雞胚尿囊液•▩◕☁◕,檢測的zu高稀釋度可達0-8~10-7,與雞胚病毒分離方法的靈敏度接近▩╃•↟。定量檢測線性範圍可達10-1010複製/ml▩╃•↟。
3•◕、特異性·▩·:採用新基因序列資料庫設計•▩◕☁◕,並透過系統驗證新城疫病毒RT-PCR能夠檢測所有已知新城疫病毒毒株▩╃•↟。對於其它禽類感染因子•▩◕☁◕,本試劑盒檢測結果為陰性
4•◕、產品盒組成·▩·:(不包括新城疫病毒RNA提取試劑•▩◕☁◕,使用者可採用通用型病毒RNA提取試劑盒或試劑盒推薦的提取方法▩╃•↟。)
組成成份(48T/kit)
1•◕、RNA提取液30ml 1瓶
2•◕、DEPC水5ml 1瓶
3•◕、新城疫病毒RT-PCR一步法反應液 920u|1管
4•◕、逆轉錄酶(5U/ul)
5•◕、使用說明書一份
