一.氯黴素快速檢測試劑盒原理及用途
氯黴素快速檢測試劑盒採用間接競爭ELISA方法檢測尿樣▩│•✘✘、組織▩│•✘✘、飼料等樣本中的氯黴素✘╃₪◕,試劑盒由預包被偶聯抗原的酶標板▩│•✘✘、辣根酶標記物▩│•✘✘、抗體▩│•✘✘、標準品及其他配套試劑組成▩╃·•◕。檢測時✘╃₪◕,加入標準品或樣品溶液✘╃₪◕,樣本中的氯黴素和酶標板上預包被偶聯抗原競爭抗氯黴素抗體✘╃₪◕,加入酶標記物後✘╃₪◕,用TMB底物顯色✘╃₪◕,樣本吸光度值與其所含氯黴素含量成負相關✘╃₪◕,與標準曲線比較即可得出樣本中氯黴素的殘留量▩╃·•◕。
二.技術指標及組成
試劑盒靈敏度↟│◕╃╃:0.05ppb(ng/ml)
反應模式↟│◕╃╃:25℃✘╃₪◕,30min~15min
酶標板▩│•✘✘、標準品▩│•✘✘、高標準品▩│•✘✘、酶標記物▩│•✘✘、抗體工作液▩│•✘✘、底物液A▩│•✘✘、底物液B▩│•✘✘、終止液▩│•✘✘、濃縮洗滌液▩│•✘✘、復溶液
三.【*優勢】
1▩│•✘✘、產品種類齊全▩│•✘✘、質量可靠▩│•✘✘、*▩│•✘✘、靈敏度高▩│•✘✘、效果穩定▩│•✘✘、易儲存▩│•✘✘、操作簡便
2▩│•✘✘、免費提供產品zui新報價▩│•✘✘、實驗原理▩│•✘✘、產品用途及中英文說明書
3▩│•✘✘、發貨及時(上海本地客戶有專門人員送貨上門及取標本)
4▩│•✘✘、免費提供ELISA代測服務,臻科擁有自己的實驗室(北京▩│•✘✘、上海▩│•✘✘、武漢)和技術團隊✘╃₪◕,公司提供*的售前▩│•✘✘、售中▩│•✘✘、售後,為您解決實驗過程中遇到的問題▩╃·•◕。想要了解更多臻科實驗代做服務,請▩╃·•◕。
四.需要的器材
儀器↟│◕╃╃:酶標儀▩│•✘✘、印表機▩│•✘✘、均質器 ▩│•✘✘、氮氣吹乾裝置▩│•✘✘、振盪器▩│•✘✘、離心機▩│•✘✘、刻度移液管▩│•✘✘、天平(感量0.01g)
微量移液器↟│◕╃╃:單道20µl-200µl✘╃₪◕,100µl-1000µl▩│•✘✘、多道300µl
五.樣本處理前須知↟│◕╃╃:
實驗器具必須潔淨並使用一次性吸頭✘╃₪◕,以避免汙染干擾實驗結果▩╃·•◕。
配液↟│◕╃╃:
配液1↟│◕╃╃:0.1M HCl 溶液 取0.86ml濃HCl加去離子水至100ml▩╃·•◕。
配液2↟│◕╃╃:0.1M NaOH 溶液 稱取0.4g NaOH加去離子水至100ml▩╃·•◕。
配液3↟│◕╃╃:乙腈-0.1M HCl 溶液 V乙腈:V0.1M HCl =84:16▩╃·•◕。
配液4↟│◕╃╃:復溶液
將10×復溶液用去離子水10倍稀釋✘╃₪◕,用於樣本的復溶✘╃₪◕,復溶液在4℃環境可儲存一個月▩╃·•◕。
六.操作流程
將所需試劑從4℃冷藏環境中取出✘╃₪◕,置於室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時可能會有結晶需恢復到室溫以充分溶解✘╃₪◕,每種液體試劑使用前均須搖勻▩╃·•◕。取出需要數量的微孔板及框架✘╃₪◕,將不用的微孔板放入自封袋✘╃₪◕,保存於2-8℃▩╃·•◕。
實驗開始前✘╃₪◕,用去離子水將20×濃縮洗滌液按20倍稀釋成工作洗滌液▩╃·•◕。
編 號↟│◕╃╃:將樣本和標準品對應微孔按序編號✘╃₪◕,每個樣本和標準品做2孔平行✘╃₪◕,並記錄標準孔和樣本孔所在的位置▩╃·•◕。
加樣反應↟│◕╃╃:加標準品或樣本50µl/孔到各自的微孔中✘╃₪◕,然後加酶標記物50µl/孔✘╃₪◕,再加入50µl/孔的抗體工作液✘╃₪◕,用蓋板膜封板✘╃₪◕,輕輕振盪5秒混勻✘╃₪◕,25℃反應30分鐘▩╃·•◕。
洗 滌↟│◕╃╃:小心揭開蓋板膜✘╃₪◕,將孔內液體甩幹✘╃₪◕,用工作洗滌液250µl/孔充分洗滌5次✘╃₪◕,每次間隔30秒✘╃₪◕,用吸水紙拍幹(拍幹後未被清除的氣泡可用乾淨的槍頭刺破)▩╃·•◕。
顯 色↟│◕╃╃:每孔加入底物液A 50µl✘╃₪◕,再加底物液B 50µl✘╃₪◕,輕輕振盪5秒混勻✘╃₪◕,25℃避光顯色15分鐘▩╃·•◕。
終 止↟│◕╃╃:每孔加入終止液50µl✘╃₪◕,輕輕振盪混勻✘╃₪◕,終止反應▩╃·•◕。
測吸光值↟│◕╃╃:用酶標儀於450nm處測定每孔吸光度值(建議用雙波長450/630nm)▩╃·•◕。測定應在終止反應後10分鐘內完成▩╃·•◕。
七. 結果分析
百分吸光率的計算
標準液或樣本的百分吸光率等於標準液或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以*個標準液(0ppb)的吸光度值✘╃₪◕,再乘以100%✘╃₪◕,即
百分吸光度值(%)= | A | ×100% |
A0 |
A—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb標準溶液的平均吸光度值
標準曲線的繪製與計算
以標準液百分吸光率為縱座標✘╃₪◕,對應的標準液濃度(ppb)的對數為橫座標✘╃₪◕,繪製標準液的半對數曲線圖▩╃·•◕。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中✘╃₪◕,從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度✘╃₪◕,乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中待測物的實際濃度▩╃·•◕。
若利用試劑盒專業分析軟體進行計算✘╃₪◕,更便於大量樣本的準確▩│•✘✘、快速分析▩╃·•◕。(索取)
八.注意事項
室溫低於25℃或試劑及樣本沒有回到室溫(25℃)會導致所有標準的OD值偏低▩╃·•◕。
在洗板過程中如果出現板孔乾燥的情況✘╃₪◕,則會出現標準曲線不成線性✘╃₪◕,重複性不好的現象▩╃·•◕。所以洗板拍幹後應立即進行下一步操作▩╃·•◕。
混合要均勻✘╃₪◕,洗板要*✘╃₪◕,在ELISA分析中的再現性✘╃₪◕,很大程度上取決於洗板的*性▩╃·•◕。
在所有孵育過程中✘╃₪◕,用蓋板膜封住微孔板✘╃₪◕,避免光線照射▩╃·•◕。
不要使用過了有效期的試劑盒✘╃₪◕,不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑▩╃·•◕。
顯色液若有任何顏色表明變質✘╃₪◕,應當棄之▩╃·•◕。0標準的吸光度值小於0.5個單位(A450nm< 0.5 )時✘╃₪◕,表示試劑可能變質▩╃·•◕。
反應終止液有腐蝕性✘╃₪◕,避免接觸皮膚▩╃·•◕。
九.特別說明
由於不同指標檢測的樣本是不同的✘╃₪◕,處理方式也是不盡相同✘╃₪◕,如需瞭解更多✘╃₪◕,更詳細的技術引數可我司客服專員✘╃₪◕,歡迎廣大社會各界朋友前來諮詢和了解▩╃·•◕。