布魯氏菌檢測試劑盒利用實時熒光PCR原理☁╃↟•╃,主要用於布魯氏菌的定性篩查檢測✘₪◕╃▩。針對布魯氏菌基因設計特異性引物和分子信標探針☁╃↟•╃,在待檢樣本中含有布魯氏菌DNA的情況下☁╃↟•╃,PCR反應得以進行並釋放熒光訊號✘₪◕╃▩。利用儀器對PCR過程中相應熒光訊號進行實時監測和輸出☁╃↟•╃,實現檢測結果的定性分析✘₪◕╃▩。
布魯氏菌檢測試劑盒檢驗方法☁✘:
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘☁╃↟•╃,恢復至室溫✘₪◕╃▩。
2.取所需用量酶標板條☁╃↟•╃,設空白對照1孔☁☁✘✘✘、陰性/陽性對照各2孔☁╃↟•╃,未用的板條儘快密封☁╃↟•╃,2~8℃儲存✘₪◕╃▩。
3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl;陰☁☁✘✘✘、陽性對照孔分別加入陰☁☁✘✘✘、陽性對照100μl;樣品孔每孔加入稀釋後的樣品100μl✘₪◕╃▩。
4.混勻☁╃↟•╃,置37℃反應30分鐘✘₪◕╃▩。
5.扣去孔內液體☁╃↟•╃,每孔加滿洗滌液☁╃↟•╃,靜置30秒後棄去☁╃↟•╃,重複洗滌5次☁╃↟•╃,拍幹✘₪◕╃▩。
6.每孔加酶標記物100μl(空白孔除外)✘₪◕╃▩。置37℃反應30分鐘✘₪◕╃▩。
7.洗滌☁╃↟•╃,扣去孔內液體☁╃↟•╃,每孔加滿洗滌液☁╃↟•╃,靜置30秒後棄去☁╃↟•╃,重複洗滌5次☁╃↟•╃,拍幹✘₪◕╃▩。
8.每孔依次加底物液A☁☁✘✘✘、底物液B各50μl☁╃↟•╃,混勻☁╃↟•╃,37℃避光反應10分鐘✘₪◕╃▩。
9.每孔加終止液50μl☁╃↟•╃,混勻☁╃↟•╃,用空白孔調零☁╃↟•╃,於450nm測定各孔吸光值✘₪◕╃▩。
布魯氏菌檢測試劑盒正確使用注意☁✘:
1.準備過程☁╃↟•╃,試劑操作準備的不當很可能影響酶聯免疫吸附測定ELISA結果✘₪◕╃▩。
2.當混合蛋白溶液時應儘量輕緩☁╃↟•╃,避免起泡✘₪◕╃▩。
3.洗滌過程非常重要☁╃↟•╃,不充分的洗滌易造成假陽性✘₪◕╃▩。
4.一次加樣時間控制在5分鐘內☁╃↟•╃,如標本數量多☁╃↟•╃,推薦使用排槍加樣✘₪◕╃▩。
5.請每次測定的同時做標準曲線☁╃↟•╃,做復孔✘₪◕╃▩。
6.如標本中待測物質含量過高☁╃↟•╃,請先稀釋後再測定✘₪◕╃▩。